黃曲霉毒素B1屬于自然界強(qiáng)烈的致癌物質(zhì)之一。 它一般產(chǎn)生于玉米，花生，巴西堅(jiān)果和棉花種子中。 鑒于這種霉菌毒素的毒性，歐洲 做出了相近的限量，對(duì)黃曲霉毒素B1的限量為2ppb，對(duì)黃曲霉毒素總量的限量為4ppb。

　　使用酶標(biāo)儀能夠快速而準(zhǔn)確的檢測(cè)谷物，飼料和其他食品中的黃曲霉毒素B1。

　　檢測(cè)原理

　　黃曲霉毒素B1檢測(cè)試劑盒應(yīng)用直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附原理。

　　(1)樣品提取液或黃曲霉B1標(biāo)準(zhǔn)品100ul與酶聯(lián)偶合物200ul，混合后取100ul，

　　(2)加入到抗體包被的微孔中等待15分鐘，

　　(3)洗板去除未參加抗原-抗體反應(yīng)的黃曲霉毒素B1,

　　(4)酶的底物100ul加入到微孔中，等待5分鐘，顏色變?yōu)樗{(lán)色，顏色的深淺與黃曲霉毒素B1的含量成反比，

　　(5)加入終止液100ul，顏色變?yōu)辄S色，

　　檢測(cè)步驟

　　1.取固體或液體樣品5ml，加入25ml 70%的甲醇，混勻3分鐘，靜止10分鐘，過(guò)濾，收集濾液，吸取100ul濾液加100ul分析緩沖液，混勻。

　　2.取出綠色的稀釋孔和無(wú)色的有抗體包被的稀釋孔各放入一個(gè)板架上。

　　3.吸取200ul酶聯(lián)偶合物加入到綠色的稀釋孔，再吸取100ul標(biāo)樣(0、2、5、20、50ppb)，和100ul步驟1的待檢混合樣，混勻3次。

　　4.然后從300ul混合物中吸取100ul加入到無(wú)色的有抗體包被的稀釋孔中，靜止15分鐘。

　　5.將孔中的液體倒掉，用蒸餾水沖洗每個(gè)孔，將微孔倒置于紙巾上把水吸干。

　　6. 加入100ul底物，放置5分鐘，顏色變?yōu)樗{(lán)色。

　　7. 加入100ul終止液，顏色變?yōu)辄S色。

　　8. 上機(jī)檢測(cè)，(酶標(biāo)儀濾鏡450nm，示差濾鏡630nm)

　　9. 稀釋倍數(shù)f：1

　　10. 定量限：生奶0.002ug/kg，

　　11. 牛奶或花生醬≤20ug/kg，合格，

　　12. 計(jì)算公式：X= c*f

　　備注：

　　1. 酶聯(lián)偶合物25ml ：sensitive conjugate 底物15ml ：substrate 終止液15ml ：stop solution 分析緩沖液 15ml ：assay buffer

　　2. 試劑盒在使用前恢復(fù)到室溫(18~30度)，使用完畢后，放入2~8度冰箱冷藏

　　3. 標(biāo)樣中含有毒素，致癌性，使用時(shí)戴好橡膠手套、安全眼鏡、工作服等防護(hù)裝備

　　4. 在讀數(shù)前，微孔中應(yīng)沒(méi)有氣泡，否則影響分析結(jié)果

　　5. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù) r ≥0.9850

　　6. 嚴(yán)格遵守規(guī)定的操作時(shí)間，否則導(dǎo)致數(shù)據(jù)不